考马斯亮蓝法是一种常用的测定蛋白质浓度的方法，其原理基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）结合后在特定波长下吸光度的变化。这种方法操作简单、灵敏度高且重复性好，因此被广泛应用于生物化学、分子生物学和临床检验等领域。

考马斯亮蓝法的基本原理

当蛋白质溶液与考马斯亮蓝G-250试剂混合时，在酸性环境下，考马斯亮蓝会与蛋白质快速结合形成复合物。这种复合物的最大吸收峰位于595nm处，而游离的考马斯亮蓝最大吸收峰则位于465nm处。通过测量595nm下的吸光度，并与已知浓度的标准品曲线进行比较，可以计算出未知样品中蛋白质的浓度。

实验步骤简述

1. 准备标准曲线：使用一系列已知浓度的蛋白质标准品，通常选择牛血清白蛋白（BSA）作为标准品，配制成不同浓度的溶液。

2. 样品处理：将待测蛋白质样品稀释至合适的浓度范围。

3. 加入试剂：向每个样品管和标准品管中分别加入等量的考马斯亮蓝G-250试剂。

4. 反应：在室温下放置一段时间（通常是5分钟），使颜色充分稳定。

5. 测量吸光度：使用分光光度计在595nm波长下测量各管的吸光度值。

6. 绘制标准曲线并计算：以标准品的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，然后根据未知样品的吸光度值从标准曲线上读取相应的蛋白质浓度。

注意事项

- 确保所有操作都在相同的条件下进行，以减少实验误差。

- 考马斯亮蓝法适用于大多数水溶性蛋白质的测定，但对于某些特殊结构或性质的蛋白质可能不适用。

- 实验过程中应避免气泡产生，因为气泡会影响吸光度测量的准确性。

考马斯亮蓝法因其简便性和可靠性，在实验室中得到了广泛应用，是蛋白质定量分析中的重要工具之一。